apotik online terpercaya

Pemanfaatan Meniran (Phyllanthus niruri) sebagai Sediaan Fitofarmaka

| June 29, 2012 | 0 Comments

Stimuno merupakan salah satu produk fitofarmaka yang beredar di Indonesia. Stimuno memiliki efek terapi sebagai immunomodulator yang dibuat dari ekstrak tanaman Phyllantus niruri (meniran) terstandardan telah melalui berbagai uji pre-klinik dan klinik. Sebagai immunomodulator (pengatur sistem imun), Stimuno membantu merangsang tubuh memproduksi lebih banyak antibodi dan mengaktifkan system kekebalan tubuh agar daya tahan tubuh bekerja optimal.

Komposisi :

Tiap 5 ml Stimuno Sirup mengandung ekstrak Phyllanthus niruri 25 mg

Tiap kapsul Stimuno mengandung Phyllanthus niruri 50 mg

Indikasi :

Membantu memperbaiki dan meningkatkan daya tahan tubuh

Petunjuk penggunaan :

Sirup untuk anak-anak usia 1 tahun ke atas

Petunjuk penggunaan :

Sirup untuk anak-anak usia 1 tahun ke atas

Anak : 3 kali sehari 1 sendok takar sirup (5 ml)

Kapsul untuk dewasa

Dewasa : 3 kali sehari 1 kapsul

Kemasan :

STIMUNO® tersedia dalam bentuk sirup 60 ml dan 100 ml untuk anak-anak serta dalam bentuk kapsul untuk dewasa

Nomor registrasi :

Stimuno sirup 60 ml dan 100 ml : POM FF 041600421

Stimuno kapsul : POM FF 041300411

Salah satu jurnal yang mendukung manfaat Phyllanthus niruri sebagai immunomodulator berjudul “Efek Ekstrak Alkaloid dari Phyllantus Niruri dalam Replikasi HIV”. Review dari jurnal ini adalah sebagai berikut:

Abstrak

Berdasarkan hasil penelitian diketahui bahwa Phyllanthus niruri memiliki efek penghambatan Virus Hepatitis B, ini terbukti dari efektivitasnya dalam pengobatan penyakit kuning (jaundice) kronis. Namun, hingga saat ini, belum ada penelitian mengenai identifikasi dan validasi gugus farmakofor pada ekstrak Phyllanthus niruri dalam air yang bertanggung jawab atas efek anti-HIV. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek anti-HIV dari alkaloid yang terkandung dalam ekstrak Phyllanthus niruri terhadap sel manusia. Efek inhibisi replikasi HIV dipantau melalui MT-4 sel yang diinduksi oleh  virus sitopatogenitas. Alkaloid dalam ekstrak Phyllanthus niruri menunjukkan aktivitas inhibisi terhadap  sel HIV-1 yang  dikultur pada sel MT-4. Dalam ekstrak diperoleh kadar CC50 279,85 µg/mL sedangkan EC50 20,98 µg/mL. Indeks Selektivitas yang diperoleh 13,34, angka ini menunjukkan toksisitas selektif ekstrak terhadap sel virus. Alkaloid pada ekstrak Phyllanthus niruri menunjukkan respon peningkatan sensitifitas penghambatan terhadap efek sitopatik yang diinduksi oleh HIV pada sel MT-4 manusia dalam konsentrasi yang diuji.

Pendahuluan

Phyllanthus niruri Linn telah digunakan dalam pengobatan Ayurvedic selama lebih dari 2.000 tahun dan telah digunakan dalam jumlah macam penyakit tradisional seperti penyakit kuning, gonorrhea, menstruasi sering, dan diabetes dan topikal sebagai tapal untuk luka kulit, luka, bengkak, dan gatal-gatal. [1] Tanaman ini memiliki peran dalam gangguan hati karena efeknya sebagai obat penurun panas, antiseptik, deobstruent dan diuretik. [2] Ini mengurangi permasalahan pada GIT seperti dispepsia, diare kolik, dan disentri serta menormalkan fungsi GIT. [3] Tunas muda tanaman digunakan dalam bentuk infus untuk pengobatan disentri kronis.[4] Phyllanthus niruri mengandung lignan (misalnya, fillantin dan hipofillantin), alkaloid, dan bioflavonoid (misalnya, quercetin). [1]Phyllanthus menghambat DNA polimerase, enzim yang diperlukan untuk virus hepatitis B (HBV) untuk bereproduksi. [5] Juga diketahui menghambat polimerase DNA HBV dan mengikat HbsAg secara in vitro [6]. Fakta bahwa isolat Phyllanthus niruri memiliki daya hambat terhadap HBV DNA polimerase dengan aktivitasnya dalam melakukan inhibisi dan mengikat HbsAg. Meskipun masih belum diketahui mekanismenya, bahan ini memiliki efek antivirus, penelitian menunjukkan bahwa ramuan ini memiliki efek pada hati. Bahan ini juga dapat digunakan untuk penyakit jaundice. Sebuah penelitian yang komprehensif difokuskan pada identifikasi farmakofor spesifik pada Phyllanthus niruri. Tujuan utama penelitian ini untuk mengidentifikasi dan mengevaluasi efek farmakologi Phyllanthus niruri sebagai anti-HIV.

Bahan dan Metode

Bahan Tanaman

Phyllanthus niruri (Bhuiamlaki) diperoleh dari Amrutlal brothers Ltd Mumbai. Anushka herbal, Mumbai, India, menampilkan identifikasi dan otentikasi tanaman dan spesimen  dari Phyllanthus niruri. Tanaman ini kemudian ditumbuk dengan mixer untuk mendapatkan bubuk kasar.

Tanaman Ekstraksi: (Fraksi alkaloid)

Serbuk kering Phyllanthus niruri (200g) dibasahi dengan amonium hidroksida 25%, didiamkan semalam dan kemudian diekstraksi menggunakan Soxhlet dengan etanol 95%. Vakum, hingga memperoleh residu seperti sirop (30g) dengan asam klorida pekat. Filtrat asam dicuci dengan benzena, membuat larutan dasar (pH 10) dengan amonium hidroksida 25% dan diekstraksi dengan kloroform untuk memperoleh fraksi alkaloid (2g).

Reagen Kimia

Reagen kimia yang digunakan medium RPMI 1640 medium (Gibco, Pulau grand, NY, USA), Serum (FCS) (Whittakar bioproduk, MD, USA) dari janin anak api, 3 – (4,5 Dimenthylthiazole-2-il) 2,5 -Diphenvltetrazolium bromide (MTT) (Wako Pure Chemical, Osaka, Jepang), F Fluorescin isothiocyanate-Konjugasi (Ab’) 2 fragmen antibodi imunoglobulin dari kelinci (Cappel, Organon Taknika Corp, West Chester, PA, USA).

Pengembangbiakan T-Sel

HTLV 1 yang diinfeksi sel  MT-4l bertahan hidup pada co-cultur leukosit dari T-sel leukemia pasien dewasa cord blood Leukocytes (CBL) (Miyoshi et al 1981). [7]

Semua baris sel ditanam dan dipelihara di bawah kondisi yang sama sebagai baris sel H9/HTLV-IIIB.

Pertumbuhan virus dan pemurnian parsial HIV diperoleh dari supernatan sel H9 yang terus terinfeksi HIV (H9/HTLV IIIB).

H9 Clone adalah OKT4 + T-cell line yang diijinkan untuk replikasi HIV. Sel H9/HTLV IIIB tumbuh dalam 75cm2 longgar tabung budidaya labu leher miring tertutup (Nunc) di RPMI 1640 medium dengan 10% v / v dipanaskan menginaktivasi serum janin anak sapi atau foetal calf serum (FCS), fungizone 2.5?g/ml dan 20?g/ml gentamisin.

Sel dipertahankan pada 37°C dalam suasana lembab dengan kadar CO2 5%. Setiap 3-4 hari, sel di rotasi dan ditanam  500.000 sel/ml dalam labu kultur sel baru. Kultur cair bebas sel dikumpulkan untuk pemurnian virus dan disimpan beku pada -70 ° C.

Produksi Virus oleh sel H9/HTLVIIIB dipantau dengan mengukur persentase sel yang terinfeksi oleh immunofluorescence assay secra tidak langsung. Untuk pemurnian virus, supernatan sel disaring melalui 0.22?m millipore filter (Millipore Corporation, Bedford, Massachusetts).

Virus kemudian dibentuk pellet pada ultracentrifuge Beckman (model L3-50) pada 4 ° C (SW 27 rotor pada 26000 rpm selama 2h). Pelet virus disuspensikan pada medium RPMI (1 / 30 dari volume awal) dan disimpan pada -70 ° C di cryotubes (Nunc).

Titran penginfeksi dari stok virus, ketika disimpan pada kondisi seperti ini, tetap stabil selama minimal 3 bulan. Stok virus yang digunakan dalam penelitian ini memiliki titer 10. CCID [50] / ml (dosis sel kultur pengingeksi 50%). Titrasi didasarkan pada uji cytopathic virus yang di bawah titik akhir 50%.

Serum anti-HIV untuk Manusia

Sebuah serum dengan titer antibodi yang tinggi terhadap HIV diperoleh dari pasien. Serum tersebut ditemukan pada ELISA-HTLV-III (rasio> 13,5), Western Blot Analysis dan immunofluorescence tidak langsung pada limfadenopati yang berhubungan dengan sel Molt (titer 1:1000). Pengenceran PBS dari serum yang positif (disimpan dalam Aliquot pada -20 ° C) digunakan dalam semua percobaan.

Peringatan Biosafety Laboratory yang diikuti selama Percobaan

Kultur virus HIV pad sel MT-4 manusia dilakukan mengikuti ‘prosedur kendali HIV’ yang ditetapkan oleh WHO dan CDC, Atlanta Amerika Serikat. Unsur paling penting dari penahanan adalah ketaatan terhadap praktek standar kultur jaringan dan mikrobiologi dan teknik yang dibutuhkan untuk penanganan strain virus dan kultur sampai terinfeksi sel-T. Kultur HIV dilakukan di laboratorium yang memenuhi standar internasional yang ditetapkan untuk tujuan ini. Pengaturan laboratorium dilakukan berdasarkan rekomendasi ketetapan P3 dan secara hati-hati diadopsi sehubungan dengan penanganan darah, cairan tubuh dan jaringan. Laboratorium telah mengembangkan manual operasional untuk identifikasi bahaya yang mungkin ditemui bersama dengan spesifikasi prosedur untuk meminimalkan atau penghapusan faktor resiko yang terlibat. Seorang ilmuwan terlatih dan berpengetahuan di teknik laboratorium, prosedur keselamatan dan bahaya terkait dengan penanganan agen infeksius dalam kegiatan laboratorium percobaan yang berkaitan dengan HIV.

Pengaruh Ekstrak Alkaloid Phyllanthus niruri pada Efek Cytopathic yang Diinduksi  oleh Sel HIV-1 / HIV-2 Manusia MT-4

Kegiatan anti-HIV dari alkaloid ekstrak Phyllanthus niruri pada HIV-1 replikasi dipantau dalam hal penghambatan yang virus-efek cytopathic diinduksi dalam MT-4 sel dengan metode MTT. [8] klinis aktif Azidothymidine (AZT) juga diuji sebagai senyawa kontrol referensi. Flat bawah, microtitre 96-baik plastik (Falcon, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ, USA) nampan telah diisi dengan lengkap 160?l medium menggunakan dispenser Titretek multitaruh (Labsystems, Finlandia). Selanjutnya, saham solusi (10 x konsentrasi ujian akhir) dari ekstrak ditambahkan dalam 40?l volume untuk dua seri rangkap tiga sumur sehingga memungkinkan evaluasi simultan efeknya terhadap HIV dan sel yang terinfeksi mengejek. Dua kali lipat pengenceran serial dibuat langsung di microtitre baki menggunakan pipet delapan-saluran Titertrek. kontrol tidak diobati, HIV dan sampel mock-sel yang terinfeksi, termasuk untuk setiap konsentrasi ekstrak. MT-4 sel yang terinfeksi dengan HIV-1IIIB pada banyaknya infeksi (MOL) [9] sebesar 0,01. HIV-atau mock-terinfeksi MT-4 sel (2x 105 sel per ml, 200?l) ditempatkan ke dalam 96-menggenang piring titer mikro dan diinkubasi di hadapan berbagai konsentrasi ekstrak. Setelah 5 hari kultur pada suhu 37 ° C dalam inkubator karbon-dioksida, viabilitas sel [9] telah dihitung dengan metode MTT. MTT assay didasarkan pada pengurangan 3 berwarna kuning – (4,5-dimethylthiazol-20y1) dehydrogenases bromida -2,5-diphenyltetrazolium mitokondria sel metabolisme aktif untuk suatu produk formazan berwarna biru, yang dapat diukur secara spektrofotometri. Solubilisasi dari kristal formazan dicapai oleh 10 persen (v / v) Triton X-100 dalam isopropanol diasamkan. Akhirnya, absorbansi yang dibaca dalam sebuah fotometer komputer delapan-saluran dikendalikan di dua panjang gelombang (540nm dan 690nm). Absorbansi diukur pada 690nm secara otomatis dikurangi dari serapan pada 540nm, sehingga dapat menghilangkan efek penyerapan spesifik non ¬. Blanking dilakukan langsung pada baki titer mikro dengan sumur kolom pertama yang berisi semua reagen kecuali untuk sel MT-4. Semua data merupakan nilai rata-rata minimal tiga sumur. Konsentrasi sitotoksik 50% (CC50) didefinisikan sebagai konsentrasi ekstrak yang mengurangi penyerapan (OD540) dari sampel kontrol mock-terinfeksi oleh 50 persen. Persen perlindungan diperoleh melalui ekstrak dalam sel yang terinfeksi oleh HIV dihitung melalui rumus berikut:

(ODT) HIV – (ODC) HIV

(ODC) mock – (ODC) HIV

Dimana (ODT) HIV adalah densitas optik yang diukur dengan konsentrasi tertentu dari uji ekstrak dalam sel yang terinfeksi HIV; (ODC) HIV adalah densitas optik diukur sebagai sel kontrol dari sel HIV yang terinfeksi yang tidak  diberi perlakuan; (ODC) adalah densitas optik yang diukur sebagai sel kontrol yang tidak diberi perlakuan; semua nilai OD ditentukan pada 540nm. Konsentrasi perlindungan mencapai 50 persen menurut formula yang telah ditentukan di atas yang didefinisikan sebagai konsentrasi efektif 50 persen (EC50). Rasio antara CC50 dan EC50 dihitung sebagai Selektivitas Index (SI).

Penentuan Ekspresi Antigen HIV dengan Immunofluorescence Tidak Langsung

Sel MT-4 di dalam sumur microtray terinfeksi dengan HIV dan terkena paparan berbagai konsentrasi dari ekstrak alkaloid p.niruri seperti yang dijelaskan untuk dampak cytopathic. Setelah diinkubasi selama 4 hari , sel MT-4 dipindahkan ke tabung Falcon-2054 dan dicuci sebanyak tiga kali dengan PBS dingin melalui sentrifugasi pada 10.000 rpm selama 5 menit. PBS yang sama juga digunakan untuk menyiapkan larutan serum, antibodi monoklonal dan flourescein isothiocyanate (FITC) yang bergabung dengan IgG. Pelet sel tersuspensi ulang dalam PBS pada konsentrasi 3 x 106 sel per ml dimana 10ml tersebut dimasukkan ke setiap sumur dari multispot slide mikroskop yang dilapisi PTFE (Poly-tetra fluorida etilena). Sel MT-4 yang terinfeksi diperlakukan dengan cara yang sama dan termasuk dalam setiap slide. Slide adalah udara kering dan tetap dalam aseton dingin pada -20 ° C selama 10 menit. Sel MT-4 yang tetap dibungkus dengan kertas penyerap, dikemas dalam aluminium foil, dan disimpan pada suhu -70 ° C sampai analisa lebih lanjut. Kemudian, slide yang dibuka pembungkusnya, dicairkan pada suhu kamar, dan 25?l serum HIV-positif (1 / 1000 larutan) ditotolkan ke setiap sumur. Slide ini kemudian diinkubasi dalam gelap selama 45 menit pada suhu 37° C dalam bejana yang lembab. Serum itu dikocok dengan satu gerakan cepat, dan slide dicuci sebanyak dua kali dengan PBS selama 10 menit dengan pengaduk magnetik. Sel-sel kemudian dikeringkan dengan kertas penyerap, dan ditandai dengan inkubasi pada suhu 37° C selama 45 menit dengan 20?l dari campuran antara IgG antihuman dari kambing yang terkonjugasi dengan isothiocyanate fluorscein (FITC) (diencerkan 1:40 dalam PBS) dan 0,0125% pereaksi Evans blue. Campuran tersebut dihilangkan dan slide dicuci dengan PBS selama 10 menit dengan pengaduk magnetik dan dikeringkan dengan kertas penyerap. Akhirnya, sel-sel direndam dalam gliserol 70% dalam PBS, dan disimpan untuk analisa lebih lanjut. kemudian slide tersebut diperiksa untuk immunofluorescence dengan mikroskop fluoresensi. Sel MT-4 yang tidak terinfeksi secara konsisten memberikan hasil negatif di bawah kondisi percobaan.

Uji Adsorpsi Virus (HIV) dengan Analisis Cytofluorographic

Efek penghambatan dari alkaloid ekstrak Phyllanthus niruri terhadap adsorpsi virus ke sel diukur dengan  immunofluorescence tidak langsung – metode Laser Flow Cytofluorographic. Sel MT-4 terpapar konsentrasi tinggi dari virus HIV-1IIIB dengan ada atau tidaknya Phyllanthus niruri. Ekstrak ditambahkan satu menit sebelum virus ditambahkan. Sel diinkubasi selama satu jam pada suhu 37° C dan dicuci sebanyak dua kali dalam buffer fosfat salin (PBS, pH 7,4) untuk menghilangkan virus yang tidak diserap. Kemudian titer yang tinggi antibodi poliklonal didapatkan dari pasien dengan AIDS yang kompleks (diencerkan 1 / 500 dalam PBS) ditambahkan. Setelah satu jam diinkubasi pada suhu 37° C, sel-sel dicuci sebanyak dua kali dengan PBS. Sel-sel kemudian diinkubasi dengan Fluorescein yang merupakan fragmen kojugasi thiocyanate dari antibodi imunoglobulin antihuman dari kelinci (diencerkan 1 / 30 dalam PBS), disuspensoikan kembali dalam 1 ml dari 0,5 persen  paraformaldehyde dalam PBS dan dianalisis dengan Laser Flow Cytofluorography.

Hasil

Upaya untuk mendapatkan informasi tentang aktivitas anti-HIV dari senyawa alkaloid ekstrak Phyllanthus niruri menunjukkan aktivitas yang menjanjikan untuk Phyllanthus niruri saat diuji pada galur sel HIV-1 yang dikultur pada sel MT-4. CC50 untuk ekstrak ditemukan sebesar 279,85 (± 15,24) ?g/mL  sedangkan EC50 itu ditemukan sebesar 20,98 (± 4.12) ?g/mL. Menariknya, Selektivitas Indeks (SI) ditemukan sebesar  13,34, yang menunjukkan toksisitas selektif alkaloid ekstrak yang jelas untuk sel virus. SI merupakan parameter penting yang mencakup baik aktivitas antivirus dan toksisitas dari komponen yang diuji (Phyllanthus niruri). Semakin tinggi nilai SI, semakin kecil toksisitas untuk sel inang dan lebih tinggi efeknya terhadap virus. SI dari senyawa Azidothymidine (AZT) ditemukan lebih besar dari 2.046,11. ekstrak alkaloid dari Phyllanthus niruri saat diuji pada sel HIV-2  juga menunjukkan hambatan yang signifikan yang terlihat pada nilai EC50 sebesar 11,53 (± 2,91) ?g/mL dengan Indeks Selektivitas sebesar 25,83 yang lebih tinggi dari yang diamati untuk sel HIV-1.

Karakteristik pertumbuhan sel yang terinfeksi HIV dan sel MT-4 yang terinfeksi palsu  menunjukkan bahwa dari 3 hari pasca infeksi, kelangsungan hidup sel MT-4 yang terinfeksi HIV cepat menurun dan pada hari ke-5, semua sel mati. Ketika ekstrak alkaloid dari Phyllanthus niruri dan Azidothymidine dievaluasi untuk efek penghambatannya di cytopathogenecity dari HIV dalam sel MT-4, terbukti cukup efektif dalam melindungi kerusakan sel oleh virus.
Konsentrasi Phyllanthus niruri diperoleh dalam uji MTT untuk sel HIV-1 yang telah diuji dalam uji adsorpsi virus hingga konsentrasi EC50hampir dua kali lipat lebih tinggi. Sebuah penghambatan yang sempurna dari adsorpsi virus ke dalam sel ditemukan pada konsentrasi yang lebih tinggi dari Phyllanthus niruri.

Diskusi

Phyllanthus niruri merupakan yang paling efektif dari kelompok spesies yang tumbuh di India, Cina, dan lokasi tropis mulai dari Filipina ke Kuba dan telah digunakan sebagai obat rakyat untuk mengobati berbagai penyakit terutama perannya dalam virus hepatitis.Para ilmuwan belum mengidentifikasikan senyawa yang bertanggung jawab untuk efek obat, tetapi herba telah terbukti dapat memblokir enzim yang memainkan peran penting dalam reproduksi virus hepatitis B (HBV). Sejauh yang diketahui, hanya ekstrak air dari Phyllanthus niruri yang telah diusulkan untuk menghambat jenis HIV tapi kemudian senyawa aktif yang bertanggung jawab atas aktivitas anti-virus belum teridentifikasi. Dalam penyelidikan farmakologi ini, ekstrak alkaloid Phyllanthus niruri menghambat secara spesifik pada kedua strain, baik HIV-1 dan HIV-2 pada sel MT-4 manusia. Sejumlah kecil Phyllanthus niruri ditemukan dapat mengurangi replikasi virus sementara konsentrasi yang lebih tinggi benar-benar menghambat reproduksinya. Lebih penting lagi, dengan indeks selektivitas yang lebih tinggi, pada konsentrasi yang dapat menghentikan replikasi virus, ekstrak alkaloid non-toksik pada sel manusia. Berdasarkan pada penemuan saat penelitian, akan lebih baik untuk menganalisis pemanfaatan dari ekstrak alkaloid Phyllanthus niruri dalam mengurangi penyakit yang mengancam jiwa yang terkait kekebalan seperti AIDS yang menjanjikan pada aktivitas anti-HIV-nya. Data yang diperoleh memiliki peranan penting yang menonjol dalam fakta bahwa studi tentang Phyllanthus niruri sampai sekarang ini belum pernah difokuskan pada identifikasi senyawa yang bertanggung jawab untuk efek penghambatan pada cytopathogenecity yang disebabkan oleh HIV pada sel MT-4 manusia. Hasil yang diperoleh menunjukkan potensi yang tersembunyi dari tanaman ini terkait efek biologisnya. Studi lebih lanjut tentang uji klinis yang berbeda dan populasi yang berbeda dengan titik pandang yang lebih luas untuk karakterisasi fungsi individual komponen Phyllanthus niruri yang bisa dijadikan sebagai lead potensial untuk optimasi lebih lanjut sebagai fokus pada masa depan penelitian.

 

 

Category: Herbal

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *