smartdetox contact
apotik online terpercaya

metode ekstraksi terbaik untuk mengidentifikasi DNA dari sampel tulang- Kimia Forensik

| July 19, 2012 | 1 Comment
  1. I. Latar Belakang

Kematian massal adalah kematian sejumlah besar orang dikarenakan satu kejadian. Kematian massal dapat disebabkan beberapa hal, seperti bencana alam, kecelakaan transportasi massal, konflik bersenjata, terorisme dan lain sebagainya. Angka kematiannya tergolong tinggi. Berdasarkan data PBB, Indonesia menempati posisi kedua, di bawah Banglades. PBB mendata sedikitnya terdapat 191.164 jiwa yang tewas akibat bencana alam di Indonesia selama 1980-2009. Di Bangladesh, bencana alam dalam 20 tahun merenggut nyawa 191.650 jiwa. Selain itu, PBB juga merinci daftar negara di Asia Pasifik yang mengalami bencana alam selama periode 1980-2009. Bencana alam itu baik berupa, banjir, kekeringan, letusan gunung berapi, tanah longsor, dan lain-lain. Indonesia menempati posisi keempat dalam jumlah kasus bencana alam di Asia-Pasifik. Selama 1980-2009, negeri ini mengalami 312 kasus. Peringkat pertama dihuni China (574 kasus), kemudian disusul India (416), Filipina (349), dan Indonesia (VIVAnews.com). Jumlah tersebut belum ditambah dengan tingginya kejadian kecelakaan pesawat, kapal laut dan terorisme yang juga berpotensial menyebabkan kematian massal.

Jenazah korban yang meninggal karena kematian massal seringkali ditemukan dalam kondisi yang sudah rusak, tidak utuh atau tinggal tulang belulang saja. Hal ini dikarenakan terjadi degradasi atau kerusakan jaringan pada jenazah. Kerusakan jaringan tersebut dapat dikarenakan terbakar, lama terkubur, terlalu lama tidak dievakuasi sehingga membusuk dan terdegradasi, sehingga sulit untuk dijadikan bahan sumber identifikasi. Tulang tidak mengalami pembusukan, sehingga dapat digunakan sebagai sumber DNA untuk identifikasi.

Identifikasi manusia melalui DNA memerlukan metode-metode tertentu, diantaranya adalah metode PCR dan STR. Untuk mengidentifikasi DNA dengan metode PCR dan STR, diperlukan marker DNA. Untuk mendapatkan DNA dari sampel tulang, diperlukan metode khusus, karena kemungkinan kondisi tulang telah rusak, kotor, dan terkena pengaruh lingkungan. Selain itu, adanya barrier fisik dan kimia dari tulang yang melindungi DNA menyebabkan reagen sulit menarik DNA. Karena itu, optimasi metode ekstraksi untuk mendapatkan DNA dari sampel tulang perlu dilakukan untuk memaksimalkan dan memudahkan analisis DNA melalui sampel tulang.

Ada 2 metode yang biasa digunakan untuk ekstraksi DNA, yaitu metode ekstraksi organik fenol/kloroform dan metode pengikatan dengan silika. Prinsip kerja dari metode ekstraksi DNA dengan silika adalah menyerap DNA dengan menggunakan silika dan garam chaotropik. Garam chaotropik berfungsi untuk merusak jaringan ikatan hydrogen dalam air sehingga membuat protein-protein yang merupakan kotoran-kotoran pada DNA denaturasi atau lisis dan asam nukleat yang lebih stabil secara termodinamika daripada struktur sebenarnya. Pada larutan pH asam ( + < 7,5 ), DNA diserap oleh silica. Sedangkan pada larutan pH basa dan konsentrasi garam rendah, DNA akan secara efisien dipisahkan dari silika. Sedangkan Prinsip kerja dari metode ekstraksi DNA dengan pelarut organik adalah pelarut organik akan mengikat, menarik, dan mempresipitasi protein sehingga fase air yang terpisah akan mengandung DNA. Larutan disentrifuse untuk mengendapkan protein sehingga air yang mengandung DNA (di lapisan atas) dapat diambil dan dianalisa. Pada makalah ini dibandingkan secara kuantitatif analisis DNA melalui PCR dan STR dengan metode ekstraksi organik  fenol/kloroform dan metode pengikatan dengan silika.

 

  1. II. Rumusan Masalah

Apakah metode ekstraksi terbaik untuk mengidentifikasi DNA dari sampel tulang ?

 

  1. III. Tujuan

Mengetahui metode ekstraksi terbaik untuk mengidentifikasi DNA dari sampel tulang.

 

  1. IV. Material dan Metode

Pengaturan Laboratorium

Laboratorium untuk uji STR dengan sampel tulang dibagi menjadi 6 area untuk pembersihan fisika, pembersihan kimiawi, grinding, ekstraksi DNA, pengaturan PCR dan amplifikasi DNA atau analisis fragmen. Semua aktivitas dilakukan dalam ruangan berlapis Plexiglas, kecuali untuk sequencer loading. Seluruh area dibersihkan tiap hari dengan 0,5% Natrium Hipoklorit dan alat yang digunakan tidak dicampur dengan alat dari area yang berbeda. Semua staf menggunakan jas laboratorium, masker, tudung kepala, sarung tangan dari nitril, dan jas laboratorium yang berbeda tiap ruangan. Semua staf secara rutin membersihkan sarung tangannya untuk mencegah terjadinya kontaminasi. Semua alat dan bahan yang digunakan bebas DNA dan di radiasi dengan sinar UV (> 1.0 J/cm) selama minimal 25 menit.

Sampel Tulang

20 tulang femur dipilih secara acak. Sampel tersebut diharapkan jumlahnya cukup banyak untuk mendeteksi tren kedua metode yang digunakan dan representatif dalam mewakili sejumlah sampel yang telah disimpan. Femur diperoleh dari korban pembunuhan di Balkan selama konflik bersenjata pada tahun 1992 hingga 1995. Berat awal dari sampel berkisar antara 12 hingga 22 gram. Sampel diperoleh dari pemakamam massal.

4.1 Pembersihan Sampel Tulang

Material di permukaan tulang seperti sum-sum tulang, jaringan yang melekat pada tulang, dan partikel lain dibersihkan dari tulang dengan rotary sanding tool (Dremel, Racine, WI, USA). Kemudian, 2-3 mm bagian permukaan tulang dikikis untuk menghilangkan kontaminan. Tulang yang tersisa ditempatkan pada tube berukuran 50 ml dan dibersihkan lebih lanjut dengan 30 ml aquades selama 30 detik, lalu dicuci dengan 10% pemutih komersial (0,5% natrium hipoklorit) selama 30 detik dan terakhir dengan 96% etanol selama 30 detik. Setelah dibersihkan dengan metode kimiawi lalu tulang dikeringkan pada suhu 50 °C selama 2 jam.

 

4.2 Grinding Tulang

Tulang yang diserbuk menjadi serbuk yang sangat halus (fine powder) menggunakan blender apparatus (Waring, Torrington, CT, USA) steril. Serbuk tulang dibagi dua sama banyak lalu dimasukkan ke dalam 2 tube berukuran 50 ml, yang masing-masing tube dapat berisi sampel berkisar antara 5,6 – 9,8 gram.

4.3 Silica-based DNA Extraction

Prosedur ini berpedoman pada Qiagen’s Maxi Kit (Qiagen, Hilden, Germany), dengan beberapa modifikasi substansial. Serbuk tulang diinkubasi pada 15 ml buffer ATL dengan 10 mg proteinase K (20 Unit/µg) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) dan 300 µL 1 M DTT (Invitrogen) dan diinkubasi pada suhu 56 °C selama 18 jam dalam shaking water bath. Digesti selanjutnya dilakukan dengan penambahan 14 mL buffer AL (Qiagen) dan didiamkan selama 30 detik dan diinkubasi pada suhu 70 °C selama 1 jam dalam shaking water bath. Tulang yang tersisa disentrifugasi (Eppendorf, Hamburgs, Germany) pada ~ 1000×g selama 5 menit dan supernatant dipindahkan ke dalam tube berukuran 50 mL lainnya. 22 mL etanol 96% ditambahkan kedalam sampel dan dicampurkan dengan inverse selama 15 detik. DNA terikat pada kolom Qiagen Blood Maxi dengan penambahan 15 ml hasil ekstraksi yang telah dicampur sebanyak 3 kali, disentrifugasi pada 2000×g selama 3 menit pada swinging bucket rotor dan me-reject yang mengalir. Kolom yang telah mengikat DNA dicuci dengan 10 mL buffer AW1 (Qiagen), disentrifugasi pada 2000×g selama 3 menit dan me-reject yang mengalir. Pencucian yang kedua dengan penambahan 10 mL buffer AW2 (Qiagen), disentrifugasi pada 2000×g selama 3 menit dan me-reject yang mengalir. Bufer AW2 yang tersisa  dipindahkan dengan cara sentrifugasi pada 2000×g selama 10 menit. DNA dieluasi dengan penambahan 3 mL buffer AE (Qiagen) yang sebelumnya telah dipanaskan hingga mencapai suhu 72 °C lalu disentrifugasi pada 2000×g selama 3 menit. Eluasi kedua dilakukan dengan metode yang sama. 6 mL DNA hasil eluasi dipekatkan hingga ± 0,5 mL dengan penambahan 15 mL kolom Centriplus YM-100 (Millipore, Billerica, MA, USA) dan disentrifugasi pada 2000×g selama 3 menit dengan swinging bucket rotor. Konsentrat 0,5 mL dipindahkan dan ditambahkan pada kolom Centricon YM-100 (Millipore), dan diputar selama 15 menit pada sudut rotor 38 ° hingga diperoleh konsentrat 50 µL. Konsentrat dicuci 2 kali dengan penambahan 2 mL air (ultra murni) lalu disentrifugasi selama 15 menit pada sudut rotor 38 ° hingga diperoleh konsentrat 50 µL. Konsentrat kemudian dipindahkan pada tube berukuran 1,5 mL. Membran Centricon dicuci dengan 100 µL air dan air tersebut kemudian ditambahkan pada tube 1,5 ml yang berisi konsentrat DNA. DNA sebanyak 150 µL kemudian dipekatkan menjadi ± 100 µL dengan vacuum concentrator (Eppendorf).

4.4 Organic Based DNA Extraction

Serbuk tulang diinkubasi dengan pengadukan pada suhu 55 °C selama 18-24 jam dalam buffer ekstraksi organik (50 mM Tris HCl, 100 mM NaCl, 50 mM asam etilendiamin tetraasetat [EDTA], 0,5% SDS, pH=8), dan 20 mg proteinase K (20 Unit/µg) (Invitrogen). Setelah inkubasi, tambahkan 20 mL fenol/kloroform/isoamilalkohol (25:24:1) (Invitrogen), tube dikocok selama 30 detik, dan diputar (spun) selama 20 menit pada 2000 x g. Supernatan dipindahkan ke wadah lain yang berisi 20 mL kloroform/isoamilalkohol (24:1), dikocok selama 30 detik, dan diputar (spun) selama 20 menit pada 2000 x g. Ekstraksi dengan kloroform/isoamilalkohol diulang lagi dengan cara yang sama. Larutan yang mengandung DNA dipekatkan hingga 0,5 mL menggunakan konsentrator Centriplus YM 100.  Konsentrat dipindahkan dari kolom Centriplus, dan dimasukkan ke dalam kolom Centricon YM-100, dan diputar selama 15 menit pada sudut rotor 38 ° hingga diperoleh konsentrat 50 µL. Konsentrat tersebut kemudian di cuci dua kali dengan penambahan 2 mL air (ultra pure), lalu disentrifugasi selama 15 menit pada sudut rotor 38 ° hingga diperoleh konsentrat 50 µL. Kemudian konsentrat dipindah ke tube 1,5 mL. Membran Centricon dicuci dengan 100 µL air lalu dimasukkan ke dalam tube 1,5 mL bersama konsentrat DNA. 150 µL DNA lalu dipekatkan hingga 100 µL dalam vacuum concentrator (Eppendorf).

 

 

4.5 Amplifikasi dan Analisis Fragmen

10 µL ekstrak yang diperoleh dari masing-masing metode diamplifikasi. Amplifikasi dilakukan pada Applied Biosystems (ABI, Foster City, CA, USA) 9700 thermocycler menggunakan Promega (Madison, WI, USA) PowerPlex 16 (PP16) kit. Kondisi amplifikasi yang direkomendasikan diikuti, dengan hanya satu modifikasi. Waktu untuk ekstensi pada suhu 72°C digandakan dari 30 detik menjadi 1 menit untuk 10 siklus pertama, dan dari 45 detik menjadi 90 detik untuk 22 siklus berikutnya. Fragmen STR yang di amplifikasi di analisis pada ABI 3100 DNA sequencer menggunakan prosedur pada manual yang disediakan Promega. Data dianalisis menggunakan software ABI GeneScan and Genotyper (versi 3.7). PowerTyper Macro V.2 (biosistem yang diaplikasikan) digunakan untuk genotype sampel. Lokus yang dilaporkan adalah hasil dari duplikasi amplifikasi yang tidak menimbulkan keraguan.

4.6 Kuantifikasi DNA dan Assesmen inhibitor PCR dalam Ekstrak

Semua ekstrak DNA yang dikuantifikasi diduplikasi, dengan real-time DNA, menggunakan sistem Applied Biosystems total Human Qualifier dan system Applied Biosystems 7700 Sequence Detection. Sistem kuantifikasi ini melibatkan reaksi duplex PCR dengan dua set independen dari PCR primer dan probe TaqMan. Satu set primer dan 6-FAM-labeled TaqMan probe spesifik untuk DNA manusia, sedagkan set primer lainnya dan target VIC-labeled TaqMan probe yang merupakan sekuen sintetik yang diutamakan dalam setiap reaksi amplifikasi sebagai kontrol positif. Sinyal 6-FAM dimonitoring dengan system deteksi sequence ABI dan kuantifikasi dapat dikalkulasi berdasarkan sinyal amplifikasi. Plot amplifikasi dari probe VIC-labeled digunakan untuk determinasi bila inhibitor PCR telah ada pada ekstrak DNA. Inhibitor PCR mempengaruhi awal kerja amplifikasi eksponensial, dan oleh karena itu dapat dideteksi dengan menggunakan peningkatan nilai Ct untuk kontrol positif (yang seharusnya masih dalam nilai konstan bila tidak terdapat inhibitor PCR).

 

 

  1. V. Pembahasan

Metode ekstraksi DNA menggunakan silika yang telah dilakukan terbukti sangat efektif dalam menyediakan profil PP16 STR dari tulang dan gigi dari jasad yang berumur 3-15 tahun dan yang telah terpapar oleh berbagai kondisi lingkungan yang merusak. Seringkali telah kontak dengan tanah dan bahan lain dalam kuburan masal yang mendekomposisi tubuh. Bahkan, jika metode ini digabungkan dengan STR typing, akan memberikan tingkat keberhasilan 95,4% dari 1823 sampel tulang atau gigi dari tsunami asia pada tahun 2004 yang diidentifikasi oleh ICMP. Tingkat keberhasilan metode ini cukup tinggi daripada penelitian awal di Yugoslavia yang diekstraksi menggunakan metode organik standar oleh ICMP. Atau diluar laboratorium. Penelitian kali ini dilakukan pada sampel tulang yang sama menggunakan kedua metode tersebut untuk menverifikasi dan mengembangkan perbandingan analisis. Metode silika menghasilkan jumlah DNA yang lebih tinggi dengan tingkat hambatan yang lebih rendah daripada metode organik.

 

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel tulang paha yang memiliki kandungan DNA tertinggi dibandingkan semua bagian tulang lainnya, kecuali gigi. DNA dalam kuantitas besar telah berhasil diisolasi dengan metode ekstraksi silika, disarankan menggunakan buffer pencerna atau penghancur ATL dan AL yang lebih efisien daripada buffer ekstraksi organik Tris/NaCl/sds/50mM EDTA dalam melepaskan DNA dari sampel tulang. EDTA juga  tersedia dalam bentuk buffer Qiagen, meskipun konsentrasinya tidak diketahui secara umum. Buffer telah ditetapkan bahwa demineralisasi penuh serbuk tulang dengan menggunakan DNA konsentrasi tinggi memberikan efek yang sangat bermanfaat dalam perolehan kembali DNA. Keberadaan jumlah serbuk tulang setelah diekstraksi menggunakan silika oleh ICMP menunjukkan bahwa demineralisasi tidak lengkap. Alasan lain yang mungkin untuk hasil akhir DNA yang besar didapat karena membran silika Qiagen lebih efektif dalam merekoveri DNA daripada proses pemisahan menggunakan teknik ekstraksi organik.

Sistem kuantifikasi Real-time PCR. Quantifiler yang dipilih untuk menentukan jumlah DNA yang terekstraksi dari sampel tulang karena metode ini juga akurat untuk rentang konsentrasi DNA yang komponen penghambat PCR di dalam ekstrak DNA. Teknik ekstraksi DNA menggunakan silika menunjukkan isolat rata-rata lebih banyak daripada metode ekstraksi organik. Sampel yang diekstraksi oleh ICMP dengan metode ekstraksi silika menghasilkan 23 pg/µl atau lebih, ketika hanya 45% dari sampel terekstraksi dengan metode organik. Ekstraksi organik juga menunjukkan tingkat hambatan yang tinggi, dengan 65% dari ekstrak menunjukkkan peningkatan 1 cycle atau lebih pada harga Ct Quantifiler untuk kontrol positif internal.

 

Perlu diketahui bahwa ketika jumlah DNA yang diinput kedalam reaksi PCR kurang dari 250 pg, hasilnya dapat menunjukkan efek stokastik, seperti ketidakseimbangan puncak dan allele dropout. Sampel pada penelitian ini memiliki lebih dari 150 pg DNA untuk direaksikan ke dalam PCR sehingga dapat meng-amplifikasi keenam belas lokus STR; termasuk semua sampel yang diekstraksi menggunakan metode ekstraksi silika. Disisi lain, 10 ekstrak DNA yang diperoleh melalui metode ekstraksi dengan pelarut organik menghasilkan konsentrasi DNA 60-150 pg, yang nantinya akan diujikan ke dalam reaksi PCR dengan volum 10 µl, 4 dari ekstrak tersebut berhasil meng-amplifikasi 16 lokus STR, 4 lainnya dapat berhasil meng-amplifikasi 13 lokus STR, dan 2 sampel lainnya tidak menghasilkan profil lokus yang sempurna (partial). Sampel 9100990 dan 9102658 yang diekstraksi dengan metode pelarut organic tidak menghasilkan profil yang sempurna, namun karena kedua sampel tersebut mengalami inhibisi  (dengan peningkatan Crs oleh pada 3 dan 5 siklus, bila dibandingkan dengan metode silika), maka tidak dapat diketahui penyebabnya. Penyebab diperolehnya profil lokus yang tidak sempurna dapt disebabkan oleh kadar DNA rendah, adanya inhibitor atau hambatan pada proses amplifikasi ataupun kedua faktor tersebut.

Sehingga dapat disimpulkan bahwa sulit untuk memprediksi urutan DNA atau karakteristik tulang. Sesuai dengan pernyataan ini sampel yang menghasilkan jumlah DNA yang rendah atau profil parsial tidak dapat menunjukkan karakteristik yang sesuai sehingga menyebabkan terjadinya spekulasi mengapa metode tersebut gagal atau mengapa terjadi variasi hasil yang berbeda antara kedua metode tersebut. Metode ekstraksi dengan silika dapat memberikan nilai rekoveri yang tinggi sehingga dapat diperoleh profil DNA yang sempurna, kemampuan untuk memperoleh profil nuclear STR dari tulang yang mengalami degradasi dapat diaplikasikan untuk identifikasi forensik dalam bencana masal, serangan teroris, maupun kuburan masal. Penting untuk membandingkan dan mendokumentasikan karakteristik dan efikasi dari berbagai metode ekstraksi DNA dengan tujuan menghasilkan landasan untuk menyeleksi teknik yang paling tepat dan untuk menentukan kemampuan dan keterbatasan  dari metode yang digunakan. Metode ekstraksi DNA dengan silika yang dikembangkan oleh ICMP menunjukkan tingkat keberhasilan yang tinggi pada berbagai sampel. Metode ini menghasilkan rangkaian DNA yang sempurna, tidak memberikan hambatan pada proses amplifikasi, dan menghasilkan profil STR  yang lebih baik dibandingkan dengan metode standar ekstraksi DNA dengan pelarut organik.

  1. VI. Kesimpulan

Metode ekstraksi DNA menggunakan silika menunjukkan tingkat keberhasilan yang tinggi pada berbagai sampel. Metode silika menghasilkan kuantitas DNA yang lebih besar, hambatan amplifikasi yang lebih rendah dan tingkat keberhasilan yang lebih tinggi dalm memperoleh profil STR dibandingkan metode ekstraksi standar dengan pelarut organik.


Daftar Pustaka

Devore, J., Vanek, D., Konjhodzic, R., Crew, J., Huffine, E., Parsons, T, J., 2007, Highly effective DNA extraction method for nuclear short tandem repeat testing of skeletal remains from mass graves, Croat Med J,  Vol. 48, p 475-85

Anonim, 2011a. PCR. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Diakses tanggal 3 Mei 2011.

Anonim, 2011b. Short Tandem Repeats (STRs). http://www.forensicdnacenter.com/. Diakses tanggal 3 Mei 2011.

 

 

MAU TURUN BERAT BADAN DENGAN CEPAT 5-20 KG DALAM 20 HARI ?

Adalah sebuah Program detoksifikasi atau pembuangan toksin dalam tubuh yang dilakukan selama 20 - 40 hari dan berefek pada turun berat badan atau mendapatkan berat badan ideal

KAMI TELAH MEMBUKTIKAN SENDIRI!

haris

Turun 27 Kg dalam 20 hari, 42 Kg dalam 40 Hari, dan 57 Kg dalam waktu 120 Hari

 

slider-9

Turun 16 Kg, dalam 20 Hari, Bebas Sakit kepala dan badan jadi segar

 

Ronni Waluya Testi Smart Detox

Ronny Waluya Presenter, MC, Singer Turun 8 Kg

ibu Mia

Ibu Mia Sutanto Ketua AIMI

yang baru saja terpilih sebagai Her World Most Powerful Woman 2013

 

MARI MENGENAL PROGRAM SMART DETOX LEBIH LANJUT!

Coba Jawab Pertanyaan dibawah ini:

Apakah Anda kelebihan berat badan dan sering makan berlebihan?

Apakah Anda Susah BAB dan punya masalah dengan pencernaan lain?

Apakah Anda mudah lelah dan kurang bugar?

Apakah Anda sering sakit kepala atau sakit di bagian tubuh lain?

Apakan Anda menderita alergi makanan dan alergi lingkungan?

Apakah Anda gemar makan fast food dan makanan yang digoreng?

Apakah Anda Sering minum Obat-Obatan kimia?

Apakah Anda punya gejala diabetes dan hipertensi

Apakah Anda Merokok?

Apakah Anda Jarang Olah Raga?

Apakah Anda Jarang Makan Sayuran dan buah-buahan?

Apakah Anda sering Kencing?

Apakah Anda sering kesemutan pada tangan dan kaki?

 

Jika Ternyata Jawabannya YA...

MAKA ANDA HARUS SEGERA MEMBERSIHKAN DIRI DENGAN DETOXSIFIKASI

DETOXSIFIKASI atau DETOX adalah suatu metode alternatif untuk membersihkan racun di seluruh organ tubuh dengan cara menyeimbangkan nutrisi yang diperlukan oleh tubuh. Dengan Nutrisi yang cukup, tubuh akan memiliki kemampuan untuk melakukan metabolisme dan membersihkan racun didalam tubuh. DETOXSIFIKASI juga akan memberikan kesempatan bagi tubuh untuk beristirahat sejenak dan mengurangi kerja ekstra mencerna makanan. Setelah tubuh menerima proses detox, tubuh akan kembali normal dan mengeluarkan racun dari makanan dan lingkungan kita.

Apabila Racun menumpuk ditubuh kita makan akan menimbulkan penyakit seperti ini:

 

akibat penumpukan toksinBerbagai Macam Penyakit Karena Penumpukan Toksin

  rokok

Kondisi Paru-Paru karena penumpukan toksin baik sebagai perokok aktif maupun perokok pasif

Fakta Yang Sangat Mengejutkan!!

bahaya makanan berlemak * Serangan jantung (Pembunuh No. 1 di Indonesia) Bagaimana ini bisa terjadi? Ketika dinding pembuluh darah yang menuju ke jantung tersumbat oleh plak-plak dan darah beku Apa gejalanya ? - Terasa tertekan pada daerah dada - Berkeringat & Napas pendek - Sakit pada daerah dada sebelah kiri - dll Celakanya! banyak kasus sakit jantung bahkan tidak memiliki gejala apapun! (Masih ingat Artis Ricky Jo & Adjie Massaid?)

Agar tubuh Anda selalu sehat, Organ-organ yang harus di detox:

DETOX your body  

SOLUSI DARI SEMUA ITU, SMART DETOX

Produk Smart Detox  

Apa Itu Smart Detox? Program dahsyat ini adalah program untuk membuang habis racun/toksin yang ada dalam tubuh kita dan dijalankan selama 20-40 hari. Program ini bisa dilakukan oleh siapa saja lho dan tentunya bisa dilakukan untuk berbagai kalangan umur (Program ini bisa dijalanjan oleh ibu menyusui). Hasil detox yang dikeluarkan oleh tubuh ini berupa lemak, cairan, minyak. Eits, dan ngga ketinggalan, Program Smart Detox ini 100% aman bagi kita dan halal pastinya.

8 Organ Penting Yang di Detox Oleh Program Ini :

1. Jantung

2. Paru-Paru

3. Darah (Pembuluh Darah)

4. Hati

5. Ginjal

6.Usus besar

7. Tulang

8. Otot

 

Apa yang dihasilkan dari detoksifikasi dengan Smartdetox?

1. Tubuh terbebas dari toksin yang menumpuk Toksin yang menumpuk dalam tubuh sangatlah berbahaya, Jika dibiarkan akan menimbulkan berbagai penyakit seperti dabetes, serangan jantung, Kolesterol, Hipertensi, dan masih banyak lagi yang lain. 2. Jalan Keluar untuk para PEROKOK Semua orang tahu bahwa rokok adalah racun, namun masih saja sulit untuk berhenti. Apakah Anda atau ada keluarga anda yang merokok?? Smart Detox adalah Solusinya, jantung dan paru-paru akan didetox/dibersihkan hingga mengurangi dampak dari rokok. 3. Jalan Keluar untuk yang tidak suka sayur dan buah Sayur dan buah sangat diperlukan untuk memenuhi nutrisi didalam tubuh Smart Detox memenuhi semua kebutuhan nutrisi tubuh sehingga membuat tubuh anda tetap sehat 4. Jalan keluar bagi kesuburan dan Meningkatkan gairah seksual Smart detox dapat meningkatkan ketersediaan testosteron untuk meningkatkan aliran darah ke daerah genital pada pria maupun wanita, peningkatan jumlah sperma dan motalitas, sehingga dapat meningkatkan gairah seksual dan meningkatkan sensitifitas pada laki-laki dan perempuan. 5. Anti Kanker Salah satu akibat dari penumpukan toksin didalam organ tubuh menjadi penyakit kanker, dengan Smartdetox akan membuant toksin sekaligus mencegah dan membunuh sel-sel kanker yang akan timbul di dalam tubuh. 6. Mendapatkan berat badan Ideal Dengan detoksifikasi bukan sekedar langsing saja yang didapat tetapi tubuh menjadi proporsional, jadi proses pembuangan toksin dari dalam tubuh Smartdetox bukan hanya membuat yang gemuk menjadi lebih langsing tetapi juga membuat yang kurus menjadi lebih berisi atau lebih ideal. Smart Detox Membuang lemak jahat, cairan, minyak dan membuang racun-racun yang menjadi sumber penyakit dan obesitas. 7. Meningkatkan Vitalitas Energi dala tubuh akan selalu terjaga dari pagi hingga malam, karena dengan Smart Detox memperbaiki sel yang rusak, memperlancar peredaran darah, dan memeperbaiki proses metabolisme energi di dalam tubuh. 8. Regenerasi Sel dan Anti Aging Proses Penuaan dini diakibatkan karena banyak sel-sel yang mati, banyak faktor yang mempengaruhi seperti makanan yang kita makan, gaya hidup, maupun kondisi lingkungan Smartdetox membantu regenerasi sel-sel yang rusak menjadi normal kembali Sehingga wajah anda semakin Cerah, bebas bau mulut, dan bebas bau badan. Smart Detox juga m emperbaiki sel-sel pembakar lemak, sehingga setelah program detoks, pembakaran lemak dalam tubuh akan maksimal dan cepat. 9. Mencegah Penyakit Stroke dan Jantung Koroner Penyebab penyakit stroke dan jantung koroner terjadi tumpukan toksin di pembuluh darah, dengan Smart Detox Pembuluh darah yang bebas dari gumpalan toksin, akan membatu darah mengalir dengan maksimal ke seluruh tubuh, maka dari itu efek positif detoksifikasi akan dirasakan seumur hidup. 10. BAB (Buang Air Besar) Lancar Toksin dalam Usus Besar akan dikeluarkan, makanan yang mengandung minyak dan berlemak yang mengendap di Usus besar akan otomatis keluar setelah kamu menjalani proses detok selain itu kandungan Fiber dalam Produk Smartdetox akan memperlancar metabolisme tubuh.

Info dan konsultasi add

Call/SMS/WA ke 081337684337

Pin BB 2A8CA5F9

BUKTI NYATA MANFAAT SMART DETOX

smart detox untuk kehamilan deha care 081 337 684 337

Bapak Rasyid dan Ibu Cita Telah Merasakan Manfaat Smart Detox Mendapatkan Anak Pertama Setelah Penantian 15 Tahun

Manfaat-detoksifikasi-smart-detox-untuk-kesuburan-081 337 684 337Oki & Farisa Impian mendapatkan keturunan 5 tahun penantian terwujud dengan Smart Detox

  Aditya RK Testimoni

Bapak Aditya RK Gangguan Liver Menahun, Kolesterol Normal, dan Berhasil berhenti Merokok

 

slider-13

Dr. Wenan tidak pernah nyeri dada lagi, nafas lebih lega, dan badan lebih bugar

smartdetox-romano

Bapak Romano Turun 33 Kg, kolesterol normal, masalah persendian dan otot teratasi,

tidak pernah lagi vertigo dan sesak napas.

  slider-32

Pak Makmur 47 Tahun Kolesterol, tensi, dan Gula darah Normal. Vitalitas dan kebugaran meningkat

Smart-DETOX-Testimoni-Kompol-Arman-Pasaribu

Kompol Norman Pasaribu Sehat, tampak lebih muda, asam urat, dan kolesterol normal.

  1374471423_514124126_2-Berat-Badan-Ideal-dengan-Smart-Detox-Balikpapan

Ibu Dina, Semua Keluhan Penyakit Hilang, lebih percaya diri dan tampil lebih cantik dan tampak lebih muda.

  1374471423_514124126_3-Berat-Badan-Ideal-dengan-Smart-Detox-Kesehatan-Kecantikan Smart-Detox-Zikirman

INI HANYA SEBAGIAN SAJA MASIH BANYAK BUKTI KEBERHASILAN YANG LAIN,

INGIN MELIHAT TESTIMONI YANG LAIN ??

klikdisini3

SEJAK PERTAMA KALI PELUNCURANNYA PRODUK SMART DETOX DITERIMA BERBAGAI KALANGAN MASAYARAKAT SECARA LUAS, DARI PEJABAT, ARTIS, DOKTER, DAN BERBAGAI LAPISAN MASYARAKAT SUDAH MENGKONSUMSI PRODUK SMART DETOK, BERIKUT INI FOTO-FOTONYA:

dokter-synergy-smart-detoXSmart Detox dipakai dikalangan para Dokter

  cara diet sehat-smart-detox

artis-smart-detox

Info dan konsultasi add

Call/SMS/WA ke 081337684337

Pin BB 2A8CA5F9

 

Smart Detox digunakan dilingkungan para artis untuk menjaga keindahan tubuh mereka

  pengguna smart detox   foto smartdetox

SMART DETOX TELAH DIKONSUMSI BERBAGAI KALANGAN

TERUS BAGAIMANA CARA MENJALANKAN METODE DETOX INI? DAN BAGAIMANA AGAR BERHASIL SEPERTI YANG LAIN?

Caranya adalah menjalankan Program Smart Detox menggunakan Formula 232 dan Selama Detox Wajib menjalankan Program yang diberikan oleh konsultan detox kami

2 3 2 Detox sudah menjadi Lifestyle . Banyak orang mencari Program Detox . Dan Program Smart Detox adalah Formula Terbaik Detox dari Synergy . Formula ini adalah bagaimana kita bisa mendetox tubuh kita secara aman, dan tetap sehat Seringkali orang salah melakukan detox yang akhirnya malah jatuh sakit ke rumah sakit . Apa sebabnya ? Karena banyak orang melakukan detox tapi tidak diimbangi dengan nutrisi yang bagus . Ingat Orang sakit pertama kali karena disebabkan oleh sel yang rusak. Dan sel yang rusak disebabkan oleh 2 hal : yaitu 1. Kurang nutrisi. 2. Toksin yang menumpuk. Program Smart Detox bukan diet ketat, dengan adanya Formula 232.. Dimana Formula 2-nya kita bisa makan nasi dan lauk, disinilah detox ini disukai banyak orang. Yaitu kita bisa membersihkan racun dengan enjoy karena masih bisa makan di pola 2 ( Tapi ingat makanannya juga makanan sehat =)

Apa Yang Dimaksud FORMULA 232 ?

Formula 2-3 -2 adalah Formula yang dijalankan selama 20 hari

Pola-2-3-2-program-smart-detox

Hari 1 – 2 ( Pre Fasting – Masa Persiapan Puasa ) : Adalah masa persiapan . Kita mulai mengubah pola makan . Semua pola makan yang biasa kita makan harus dikurangi setengah. Misal biasa makan 1 nasi dan 1 paha ayam besar. Maka kita harus kurangi dengan hanya makan setengah nasi dan setengah ayam paha . Kurangi makanan berminyak dan lemak . Dan mulai pukul 7 malam keatas sudah berhenti makan berat . Minum Produk Synergy – penting untuk menjaga nutrisi tubuh kita. Dan banyak minum air putih . Hari ke 3 – 4 – 5 ( Puasa Penuh ) : Kita mulai berPuasa . Berpuasa yang dimaksud di sini adalah tidak makan nasi dan lauk .Semua diganti dengan buah-buahan dan sayuran + Produk Food Suplemen Synergy sebagai pengganti makanan . Jadi sepanjang hari kita harus benar-benar tidak makan nasi dan lauk pauk . Tujuannya adalah agar racun yang sudah dikurangi di hari 1-2 . Pada hari-3 saatnya nutrisi synergy terserap oleh tubuh dan bekerja mem-boost atau mempercepat proses pembuangan racun dari tubuh kita . Demikian juga hari 4 – 5 . ** Notes untuk yang sakit maag dilarang puasa nasi dan lauk .. tetap makan dengan porsi setengah Hari 6- 7 ( Post Fasting – Masa Penyesuaian setelah Puasa ) : Kembali ke pola makan hari 1-2 . Yaitu mulai boleh makan nasi dan lauk pauk yang setengah . Air putih tetap banyak dan setelah pk 7 malam keatas berhenti makan nasi dan aluk pauk. Ganti dengan nutrisi synergy Ulangi Formula 2-3-2 selama 20 Hari minimal Maksimal 40 Hari . Catatan : Selama melakukan Program Smart Detox Wajib minum air putih 8 gelas sehari.. untuk mempercepat food suplemen synergy bekerja dengan baik . HASIL FORMULA Smart Detox 2-3-2 adalah : - BAB anda akan mengambang . Itu yang disebut racun/toxic. Jika belum mengambang maka racun belum keluar - Ketika anda sudah biasa melakukan formula 2-3-2 maka .. ketika anda makan gorengan, santan, soto-sotoan, jeroan rasanya menjadi tidak enak. Tubuh anda akan menolak .. Karena tubuh anda sudah bersih dari racun - Tubuh anda akan ideal, kulit lebih cerah .   Efek Samping Dari SMART DETOX ? Dalam Program Detox ini efek sampingnya adalah efek positif . 1. Ya ketika kita orang baru dan baru mulai detox untuk pertama kalinya, terus terang kita akan menjadi migrain , jangan khawatir ini biasa.. karena tubuh kita kaget dengan detox ini. 2. Perut terasa tidak enak & keluar angin berlebihan 3. Jika anda pernah menderita penyakit tertentu.. perut akan terasa nyeri Soo jika anda merasa migrain dan tidak kuat disarankan untuk STOP Detox sementara waktu . Anda harus mulai makan kembali dengan porsi sedikit demi sedikit. Kemudian coba lagi di esok harinya . + Minum Air Putih yang banyak sekali 8 gelas sehari ** Notes : untuk penderita maag dilarang puasa nasi dan lauk pauk .. Tidak disarankan .. Bagaimana Setelah Saya Selesai Menjalankan Program Smart Detox 20 hari ? Apa yang harus saya lakukan ? Ya setelah melewati 20 atau 40 hari tubuh anda sudah bersih dari racun maka cara merawatnya mudah saja 1. Anda hanya perlu merawat dengan Klorofil dan Proargi9 saja . Racun bagaimanapun juga tidak kita pungkiri akan terus masuk. Jika kita berdiri dekat orang merokok , mau tak mau racun itu masuk . Oleh karena itu pembuangan racunnya cukup dengan klorofil dan Proargi 9 saja 2. Minum air putih 8 gelas sehari 3. Jaga pola makan . Artinya jika anda ingin benar benar minum es teh manis atau makan soto betawi cukup seminggu 1 kali saja . Makanan yang harus dihindari selama Program SMART DETOX : 1. Semua jenis Karbohidrat Jahat : Nasi putih, mie instant 2. Protein Hewani Olahan : Bakso, kornet sosis,ikan kaleng,telur asin 3. Beberapa jenis gula : gula pasir.gula merah, sirop, madu 4. Bumbu instant : kecap, saos tomat, penyedap rasa, bumbu instant 5. Buah manis : Anggur, leci,strawberry 6. Jeroan : ati ampela, usus, jantug ayam 7. Santan-santanan , Soto-sotoan Makanan yang baik ketika Program SMART DETOX : 1. Protein Rendah Lemak : Dada ayam , paha ayam TANPA KULIT . Ikan segar di bakar / di kukus 2. Protein nabati ( konsumsi tidak berlebihan ) : Tempe ,tahu,kacang merah, kacang hijau (kacang-kacangan membantu menurunkan kadar kolesterol jahat LDL . tapi kacang2an tinggi kalori jadi konsumsi secukupnya . 3. Sayuran kacang panjang, kol, bayam, brokoli 4. Yoghurt tawar (tanpa perasa buah2an ) Perhatikan Kecukupan Zat gizi dalam 1 hari 1.Tubuh memerlukan 30 gram protein 1 hari : dada ayam tanpa kulit, sususkim, yoghurt tawar, ikan = memiliki protein tinggi dan rendah lemak jadi bagus sekali . KAcang2an juga bagus untuk mengisi kandungan protein dalam tubuh kita. 2. Tubuh memerlukan kira-kira 1500 kalori perhari (masih perlu makan dada ayam, putih telur agar kalori kita terjaga ,kalau kurang malah bisa lemes dan jatuh sakit ) 3. Tubuh kita memerlukan karbohidrat 60 persen dari kebutuhan energi. Pilihlah karbohidrat baik , karbohidrat kompleks : karbohidrat kompleks adalah karbohidrat yang sulit dicerna usus sehingga penyerapannya pelan dan tidak menaikan gula darah, dan akan memberikan rasa kenyang lebih lama . Contoh karbohidrat baik : nasi merah, roti gandum,singkongsayuran,buah.

Program Smart Detox Di Support Oleh Perusahaan Synergy Worlwide anak perusahaan Dari Nature Sunshine .

Perusahaan Herbal Terbaik yang telah berdiri lebih dari 40 tahun

synergy dan nature sunshine

Pilihlah Produk Yang Telah Memiliki Sertifikat FDA, TGA.GMP Program Smart Detox telah memiliki ke-3 nya

LOGO FDA GMP TGA

Telah memperoleh Sertifikat Halal & BPOM RI

BPOM Smart Detox BPOM SMART DETOX

PAKET SMART DETOX YANG BISA ANDA PILIH

smart-detox-fullpack

1. PAKET FULL PACK

Harga 3,8Juta Untuk program 20 Hari

Turun 5-10 Kg

smart detox Arginin Ultimate pack

2.PAKET ULTIMATE PACK

Harga 7,5 Juta Untuk program 20 Hari

Turun 10 - 20 Kg

Info dan konsultasi add

Call/SMS/WA ke 081337684337

Pin BB 2A8CA5F9

   

27 Negara Sudah Membuktikan Dahsyatnya Detox! Smart Detox ini sudah bersertifikat FDA, TGA, GMP dari USA & BPOM dari Indonesia. Dan tidak mudah lho untuk produk-produk yang bisa mendapatkan sertifikat ini.

Kalau dibandingkan dengan alternative lain, misalnya dengan Operai Sedot Lemak atau biasa disebut dengan Liposuction yang memakan biaya minimal 10 juta tetapi dengan tahap dan proses yang panjang, hasil belum tentu maksimal, Smart Detox menawarkan program yang bisa dilakukan dirumah, program ini tidak menimbulkan ketergantungan, tentu saja program Smart Detox ini lebih unggul dibandingkan dengan alternative lain atau merek-merek lain yang ketergantungan (kembali ke berat badan semula jika tidak mengonsumsi produk merek lain tersebut). Jadi dengan program Smart Detox ini anda bisa mendapatkan berat badan yang ideal, aman, tidak memakan biaya yang sangat mahal, bisa dilakukan dirumah, dan tidak ketergantungan.

Synergy adalah perusahaan nutrisi yang masuk di Forbes 2013 America, Sebagai Most Trustworthy Companies.

Konsultan Smart Detox Online No. 1 Program smart detox 100% AMAN! Tanpa Efek Samping! Karena terbuat dari bahan-bahan herbal dan Quality Control yang sangat baik. *Note : Tidak ada biaya tambahan, karena kami memberikan harga yang telah ditetapkan oleh perusahaan.

  Mengapa membeli smart detox di SmartDetox.co?

1. Pelayanan sangat maksimal. Program diet detox kamu akan kami pandu via BBM/SMS/Whatsapp/Line.

2. Kami 100% fulltime menjalankan ini.

3. Kami Akan memandu anda sampai dengan berhasil

4. Harga sesuai dengan yang ditetapkan perusahaan sehingga anda tidak membeli produk yang kemahalan.

5. Produk READY STOCK & tersegel dengan rapi dan aman.

6. Balas BBM/SMS cepat, bahkan sering online sampai tengah malam.

7. Paham tentang seluruh kegunaan produk.

8. Melayani Cash On Delivery (diutamakan wilayah Jakarta Selatan , Bintaro, Pondok Indah, Senayan). (COD minimal pembelian paket FullPack)

9. Free Ongkir ke Seluruh Indonesia. Free Ongkos Kirim! (untuk daerah Jawa dan Bali diluar itu ongkos kirim kami subsidi)

10. Order hari ini dan langsung kami proses hari ini juga ke kantor, karena kami FullTime menjalankan ini.

Pembayaran online Terlengkap (BCA, Mandiri, BNI, BRI).

transfer pembayaran

Smart Detox Synergy tersedia di beberapa negara di dunia! Asia : Indonesia, Australia, HongKong, Japan, Korea, Malaysia, Taiwan, Thailand, Philipines, Singapore, Vietnam. Europe : Austria, Czech Republic, Denmark, Finland, Germany, Iceland, Ireland, Netherlands, Norway, Slovenia, Poland, Spain, Sweden, United Kingdom North America : United States, Canada

Detoksifikasi Telah Mejadi Trend Warga Dunia..!!

Category: Farmasi

Comments (1)

Trackback URL | Comments RSS Feed

  1. fake rolex says:

    Hello There. I found your blog using msn. This is a really well written article. I?l make sure to bookmark it and return to read more of your useful information. Thanks for the post. I?l definitely return.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *